轉(zhuǎn)染級線性聚乙烯亞胺（MW25000）是一種基于聚乙烯亞胺的瞬時轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品，具有較高的轉(zhuǎn)染效果。聚乙烯亞胺是一種具有高陽離子電荷的有機(jī)大分子聚合物，容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復(fù)合物。該復(fù)合物與細(xì)胞表面陰離子結(jié)合，通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。該轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞毒性低，適用于多種細(xì)胞系，已廣泛應(yīng)用于重組蛋白、AAV等的生產(chǎn)。

1. 試劑配置

所需材料：

去離子水或以上生物級水、12 mol/L鹽酸（HCl）、10 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性 0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲存瓶。

儲存液配置：

⑴ 將1 g轉(zhuǎn)染級線性聚乙烯亞胺25,000溶解于900 mL去離子水中，邊攪拌（可加熱至60-80℃）邊滴加12 M鹽酸，調(diào)整至pH＜2.0，攪拌3小時以上至溶解；

⑵ 用10 M氫氧化鈉調(diào)整pH至6.9~7.1；

⑶ 將溶液轉(zhuǎn)入量筒（或量杯）內(nèi)，加水定容至1 L；

⑷ 用一次性0.2 µm過濾器真空過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲存液；

⑸ 可根據(jù)需要分裝儲存液，儲存在-20℃可保存1年；儲存液復(fù)融后不可重新凍存。

2. 轉(zhuǎn)染操作流程

接種細(xì)胞：為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度在70~80%為宜；

準(zhǔn)備DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物：

⑴ 將DNA、轉(zhuǎn)染試劑和稀釋劑先回復(fù)至室溫；

⑵ 用適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA；

⑶ 按照一定比例（每1 μg DNA需用1-5 μL轉(zhuǎn)染試劑，建議自行摸索配比），將稀釋后的轉(zhuǎn)染試劑滴加至裝有DNA溶液的試管（勿顛倒添加順序），一邊輕輕渦旋，充分混勻，室溫靜置10~25分鐘孵育。

轉(zhuǎn)染細(xì)胞：

⑴ 在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基；

⑵ 細(xì)胞中加入適量DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物，輕輕混勻，轉(zhuǎn)染6-8小時后，更換新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基；

⑶ 在37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后24小時即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)（可自行確定適合的檢測時間）。

運(yùn)輸及儲存條件

運(yùn)輸條件：室溫運(yùn)輸

保存條件：粉末在室溫或4℃保存，有效期2年。

注意事項(xiàng)

1. 對大多數(shù)細(xì)胞，每1 μg DNA使用3 μL轉(zhuǎn)染試劑能獲得較高轉(zhuǎn)染效率，也可嘗試每1 μg DNA使用1.5~4 μL轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途。